NK細(xì)胞

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產(chǎn)品廠地：上海市

更新時(shí)間：2025-02-20

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品牌	其他品牌	貨號(hào)	GOY-01X1431
規(guī)格	1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	產(chǎn)品僅供科研使用	應(yīng)用領(lǐng)域	化工

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號(hào)
NK細(xì)胞	1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶	GOY-01X1431

商品介紹：

名稱 NK細(xì)胞

NK細(xì)胞確切的來源還不十分清楚，一般認(rèn)為直接從骨髓中衍生，其發(fā)育成熟依賴于骨髓的微環(huán)境。小鼠和人的體外實(shí)驗(yàn)表明，胸腺細(xì)胞在體外IL-2等細(xì)胞因子存在條件下培養(yǎng)也可誘導(dǎo)出NK細(xì)胞。小鼠脾臟在體內(nèi)IL-3誘導(dǎo)下可促進(jìn)NK細(xì)胞的分化。NK細(xì)胞主要分布于外周血中，占PBMC5～10%，淋巴結(jié)和骨髓中也有NK活性，但水平較外周血低。

由于NK細(xì)胞具有部分T細(xì)胞分化抗原，如80～90%NK細(xì)胞CD2+，20～30%NK細(xì)胞CD3+（表達(dá)CD3ζ鏈），30%NK細(xì)胞CD8+（α/α）和75～90%NK細(xì)胞CD38+，而且NK細(xì)胞具有IL-2中親和性受體，在IL-2刺激下可發(fā)生增殖反應(yīng)，活化NK細(xì)胞可產(chǎn)生IFN-γ，因此一般認(rèn)為NK細(xì)胞與T細(xì)胞在發(fā)育上關(guān)系更為密切。

與T細(xì)胞、B細(xì)胞相比，NK細(xì)胞表面標(biāo)志的特異性是相對(duì)的。人NK細(xì)胞mIg-，部分NK細(xì)胞CD2、CD3和CD8陽性，表達(dá)IL-2受體β鏈(P75、CD122），CD11b/CD18陽性。常用檢測(cè)NK細(xì)胞的標(biāo)記有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。

一種穩(wěn)定表達(dá)在NK和LAK細(xì)胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細(xì)胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。

NK細(xì)胞活化途徑：

1、通過CD3分子的ζ鏈

NK細(xì)胞不表達(dá)TCR/CD3復(fù)合物，但部分NK細(xì)胞表達(dá)CD3ζ鏈，當(dāng)用CD16抗體刺激NK細(xì)胞活化時(shí)，ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化，引起胞漿內(nèi)Ca2+濃度升高，IP3水平增加，促進(jìn)細(xì)胞因子合成和ADCC作用。

2、通過CD2分子

CD2與CD58相互作用或用CD2McAb刺激可活化NK細(xì)胞，CD3ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化。

3、自然殺傷細(xì)胞刺激因子

自然殺傷細(xì)胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor，NKSF)對(duì)NK細(xì)胞有刺激作用。

IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin，LR)對(duì)NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用，體外培養(yǎng)時(shí)加入上述細(xì)胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素(PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質(zhì)激素等對(duì)NK細(xì)胞的活性有抑制作用。

NK細(xì)胞表面具有IL-2中親和性受體，IL-2誘導(dǎo)NK的殺傷活性約需18-24小時(shí)。此外，IL-2還可誘導(dǎo)NK細(xì)胞的增殖，一般在刺激后3～4天開始發(fā)生增殖，其機(jī)理為IL-2可誘導(dǎo)NK細(xì)胞表達(dá)IL-2Rα鏈，新表達(dá)的α鏈與原先細(xì)胞表面的β鏈和γ鏈結(jié)合形成高親和性受體，在IL-2存在下刺激NK細(xì)胞發(fā)生增殖。IL-2誘導(dǎo)NK細(xì)胞的活性機(jī)理尚不清楚，可能與增加細(xì)胞粘附分子的表達(dá)，提高對(duì)NK抵抗靶細(xì)胞的殺傷活性有關(guān)，還可能增加NK細(xì)胞胞漿中的顆粒以及絲氨酸酯酶mRNA的表達(dá)，活化和促進(jìn)殺傷介質(zhì)的殺傷作用。

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

CD16a / FCGR3A 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

小鼠 CD28 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

食蟹猴 HAVCR1 / TIM1 / TIMD1 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

CD19 / Leu-12 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

COQ7 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

IL-29 / Interleukin-29 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

恒河猴 ErbB2 / HER2 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

大鼠 ErbB2 / HER2 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

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