細(xì)胞實驗步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

NCI-H1299 細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持NCI-H1299 細(xì)胞最佳的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含NCI-H1299細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于NCI-H1299 細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

RPMI-1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                                 430 ml

特級胎牛血清                                            50 ml

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意事項：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA pcr檢測試劑盒

Human somatostatin (SS) ELISA Kit 人(SS)試劑盒

HumanPancreaticPolypeptide,PPELISAKit 人胰多肽(PP)pcr檢測試劑盒分裝

Humanai-Sa-aibody試劑盒人抗Sa抗體(ai-Sa-Ab)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物細(xì)胞周期G2期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次

HumaU3AProteinELISAKit人TU3A蛋白(TU3A)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)試劑盒 ，英文名： SOX2 ELISA Kit

Mouse heat shock protein 40 (Hsp-40) ELISA Kit 小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)試劑盒

MouseprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 小鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)pcr檢測試劑盒分裝

CLIAKitforHumanai-Sa-aibodyELISAKit人抗Sa抗體

細(xì)胞FGFR1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPRL大鼠催乳素

小鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISAKit   ELISA

小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISAKit   ELISA

小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISAKit   ELISA

小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISAKit   ELISA

神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2抗體

7號染色體開放閱讀框65抗體

IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

Juxtanodin蛋白(JN)重組蛋白 Recombinant Juxtanodin (JN)

CNPY4重組人 CNPY4 蛋白 Protein

FAM45A Protein Human 重組人 CAMK1 / CaMKI-alpha 蛋白

HAVCR1 Protein Rat 重組大鼠 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

NCI-H1299 細(xì)胞專用培養(yǎng)基Juxtanodin蛋白(JN)重組蛋白 Recombinant Juxtanodin (JN)

FAM45A Protein Human 重組人 CAMK1 / CaMKI-alpha 蛋白

IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

HAVCR1 Protein Rat 重組大鼠 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

CNPY4重組人 CNPY4 蛋白 Protein