收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

產品名稱

名稱    小鼠小腦顆粒細胞

2.組織來源：腦組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠小腦顆粒細胞分離自小腦皮層組織；神經元是神經系統最基本的結構與功能單位，小腦顆粒神經元是體積較小的神經元，直徑約10μm，在中樞神經系統中含量非常豐富，近乎神經元數量的一半。由于小腦神經元的生長、分化和大腦皮層神經元相似，而且數量多、便于取材，因此小腦顆粒神經元是研究神經元生長發(fā)育、神經軸突再生及神經疾病發(fā)生機制和臨床神經藥理的重要手段。小腦顆粒神經元是小腦主要的中間神經元，在哺乳動物的小腦內數量最為豐富。顆粒神經元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯系，形成小腦皮層內的神經元環(huán)路，在小腦的神經活動中起著非常重要的作用。在動物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒神經元，導致小腦皮層的神經元環(huán)路受損，從而呈現神經性行為失調。研究小腦顆粒神經元在動物傳染性海綿狀腦病病理學變化中的反應、病理發(fā)生的機理特別是分子機理，有賴于小腦顆粒神經元細胞模型的建立。小腦顆粒細胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維，正是這種排列保證了興奮的單向傳導，這是小腦功能理論中的關鍵假設，小腦顆粒細胞通過g-氨基丁酸接受戈爾吉細胞的抑制性突觸的信息傳入。

5.方法簡介：

實驗室分離的小鼠小腦顆粒細胞采用胰蛋白酶消化法結合神經元專用培養(yǎng)基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

實驗室分離的小鼠小腦顆粒細胞經NSE免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含B-27、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-M112

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)神經元細胞樣

傳代特性屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

產品特點:

1、 使用方便:不需昂貴設備。

2、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

一、凍存時的注意事項：

1. 在冷凍保存之前，應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高，凍存的細胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質，例如是否有雜細胞或者支原體等。

3. 使用的DMSO 應為試劑級等級，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存，勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。

4. 冷凍保存的細胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，細胞濃度不要太高，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。

4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6，依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 ％ DMSO，若是不確定細胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同時，亦應作一個backup culture，以防止冷凍失敗。